?一、?準(zhǔn)備工作
（一）微柱凝膠試劑卡的準(zhǔn)備：觀察外觀，如有干膠、雜質(zhì)、氣泡不可使用，之后將卡放置
?????室溫（18－25℃）平衡，再用專用離心機離心5分鐘。
(二)?試劑的制備：6%牛血清白蛋白（鹽水稀釋）
（三）標(biāo)本采集：采集被檢對象靜脈血，將該同一人血液分別制備成紅細(xì)胞標(biāo)本和血清標(biāo)本。
（四）紅細(xì)胞標(biāo)本的制備：用紅細(xì)胞稀釋液配制紅細(xì)胞懸液，紅細(xì)胞*終濃度為0.8%。
（五）血清標(biāo)本的制備：將被檢者靜脈血采入含兔腦粉或其它促凝劑的試管中，10分鐘后
?????離心，取上清；或者將被檢者靜脈血采入無抗凝劑試管中，4℃放置12小時，或37℃
?????放置2小時后離心，2000rpm，10分鐘，取上清。該上清不得有絮狀物或沉淀。
（六）熱放散：充分洗滌紅細(xì)胞至少三次，取同體積洗滌后的壓積血和6%牛血清白蛋白混勻，
?????置于56℃孵育10分鐘，期間不斷搖動，離心3000rpm，2－3分鐘，取上清。即放散液。
（七）酸放散：
?1、取直接抗人球蛋白試驗（DAT）陽性待檢血樣（或在體外已吸收血清的紅細(xì)胞），離心
???盡可能去除血或血漿。
?2、用生理鹽水洗滌待檢紅細(xì)胞4次，以除去未結(jié)合的抗體，留取約1ml的*后一次洗滌液。
?3、配制酸放散液：取4體積的放散液A與1體積的放散液B混合均勻。
?4、將1ml待檢壓積紅細(xì)胞與1ml酸放散液混合均勻，室溫孵育1－2分鐘。
?5、以3000rpm離心1分鐘。
?6、立即將酸放散液移到另一支干凈試管中，并加入紫紅色中和液調(diào)顏色至肉色或水粉色
??（500ul放散液加入中和液60－80ul），此時PH值近中性。以3000rpm離心1－2分鐘，
???取上清即放散液。
?7、放散液與*后一次洗滌液做平行檢測。
?8、用試管法或微柱凝膠抗人球蛋白卡檢測，出現(xiàn)陰性反應(yīng)，則需要加入人IgG致敏的紅細(xì)胞
???做確認(rèn)試驗，以保證抗人球蛋白試劑的有效性。
二、?實驗步驟
?1、取新生兒的紅細(xì)胞0.8%懸液50ul分別加入新生兒ABO、RhD血型檢測卡(微柱凝膠)卡
???的1－6孔中。
?2、使用專用離心機離心5分鐘（900rpm?2分鐘，1500?rpm?3分鐘）。
?3、取出，判讀結(jié)果。
?4、新生兒卡Ⅱ1－3孔分別加入50ul新生兒血清，4－6孔分別加入50ul新生兒紅細(xì)胞放散
???液。
?5、將A型紅細(xì)胞懸液50ul分別加入**、4孔；將B型紅細(xì)胞懸液50ul分別加入第2、5孔；
???將O型紅細(xì)胞懸液50ul分別加入第3、6孔中。
?6、37℃孵育15分鐘。
?7、取出，使用專用離心機離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500?rpm3分鐘），取出，判讀
???結(jié)果。
?結(jié)果判定
?陽性結(jié)果：紅細(xì)胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中。表明被檢者血清中含有對應(yīng)其抗原的抗體
?或血細(xì)胞被致敏。
?陰性結(jié)果：紅細(xì)胞完全沉降到凝膠底部，在凝膠管底部形成紅細(xì)胞扣。表明血清中無相應(yīng)抗
?原免疫的抗體或血細(xì)胞沒有被致敏。
?反應(yīng)強度：特異性紅細(xì)胞抗原抗體復(fù)合物位于膠表面，為強陽性反應(yīng)；復(fù)合物在膠中為弱陽
?性反應(yīng)；愈靠近膠底部顆粒愈小，反應(yīng)愈弱（2+或1+）。
?直抗試驗以出現(xiàn)凝集為陽性，游離和放散試驗均以檢出可以和新生兒紅細(xì)胞反應(yīng)的抗體
?為陽性。
三、注意事項
1、紅細(xì)胞標(biāo)本一定不能被細(xì)菌污染，否則出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。盡可能應(yīng)用當(dāng)日采集的新鮮血做
???本實驗。如不得不用過夜血或陳舊血，則必須首先用該標(biāo)本做陰性對照試驗，以確定該標(biāo)
???本是否可以做本實驗。
2、血清標(biāo)本：血清標(biāo)本必須充分去除纖維蛋白，否則標(biāo)本中纖維蛋白在微柱凝膠中析出，阻
???礙紅細(xì)胞沉淀，呈假陽性反應(yīng)。
3、如在微柱凝膠中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，強烈提示為紅細(xì)胞抗原抗體陽性反應(yīng)，也不排除其他原因
???所致溶血，故對此標(biāo)本一定認(rèn)真分析，并向上級主管技術(shù)人員多報告并討論。
4、父親紅細(xì)胞標(biāo)本也可用與其同型的A型或B型紅細(xì)胞代替。
5、洗出盡量多紅細(xì)胞進行放散；注意放散的溫度不可超過56℃，以防溶血；天冷時放散液
???注意保溫；吸出盡可能多的放散液；注意除去放散液中殘留的紅細(xì)胞；放散前紅細(xì)胞要
???充分洗滌，至少三次。
6、每日試驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。
7、試劑卡應(yīng)放在18-25℃儲存，如若長期放在4℃冰箱，建議每1-2個月取出，用專用離心
???機離心一次，以防止干膠或產(chǎn)生氣泡。
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